吖啶橙 AO / PI 雙熒光染?試劑盒

貨號(hào)：JC0318 

規(guī)格：1ml/5ml

產(chǎn)品描述

AO/PI 雙熒光計(jì)數(shù)法用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞濃度和活率。細(xì)胞染色液由吖啶橙（綠色熒光染料）和碘化丙錠（紅色熒光染料）混合而成。碘化丙錠（PI）不具有膜透過(guò)性，只能進(jìn)入細(xì)胞膜受損的細(xì)胞，而吖啶橙能夠穿過(guò)所有的細(xì)胞群體。當(dāng)兩種染料同時(shí)存在于細(xì)胞核中，碘化丙錠通過(guò)熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）引起吖啶橙熒光的減少。因此，在 Countstar® Rigel 系統(tǒng)中，具有完整的有核細(xì)胞染綠色熒光并被計(jì)為活細(xì)胞，而具有受損的有核細(xì)胞染紅色熒光并被計(jì)為死細(xì)胞。

吖啶橙(Acridine Orange), 屬于三環(huán)雜芳香染料，是經(jīng)典的、極靈敏的特異染性熒光染料，可以標(biāo)記DNA、RNA，屬于異染性熒光染料，AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測(cè)。AO與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間，這種結(jié)合方式主要為AO與DNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為530nm，激發(fā)后呈綠色熒光，其熒光發(fā)射峰為640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，AO嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色，與DNA單鏈或RNA結(jié)合時(shí)發(fā)橙紅色熒光。本試劑盒中AO與核酸結(jié)合的方式是插入性結(jié)合，因此激發(fā)后呈綠色熒光。經(jīng)AO染色后，正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體，AO使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。

碘化丙啶(PI)是一種非細(xì)胞膜通透性熒光染料，與DNA結(jié)合后的最大激發(fā)光波長(zhǎng)為535nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為617nm，不能穿過(guò)具有生物活 性的細(xì)胞質(zhì)膜，只能對(duì)于壞死細(xì)胞因?yàn)槠浼?xì)胞膜缺乏完整性而能到達(dá)細(xì)胞核[1, 2]，并嵌入壞死細(xì)胞的DNA雙螺旋形成PI-DNA復(fù)合物從而產(chǎn)生紅色熒光，因此PI僅能對(duì)死細(xì)胞染色，因此被用來(lái)區(qū)分正常細(xì)胞與壞死細(xì)胞。須特別注意凋亡細(xì)胞會(huì)因?yàn)槠浼?xì)胞膜的完整性，而無(wú)法被PI染色，僅在凋亡后期發(fā)生繼發(fā)性壞死(Secondary necrosis)時(shí)，才能被PI染色。