IPEC-J2細(xì)胞
貨號(hào)：GXCELL40005
產(chǎn)品說明
細(xì)胞系培養(yǎng)體系 所用完全培養(yǎng)基為 Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium(DMEM) 高糖，加入 10% FBS
產(chǎn)品描述
種 屬：豬(Sus scrofa)
組織來源：空腸(Jejunum)
疾 ?。何粗?Unknown)
年 齡：未知(Unknown)
性 別：未知(Unknown)
細(xì)胞形態(tài)：表皮細(xì)胞(Epithelial)
生 長 特性 ：貼壁生長 (Adherent)
拆包 & 存儲(chǔ)
1、請(qǐng)立即檢查包裝袋是否有破損或漏液
2、請(qǐng)立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進(jìn)行培養(yǎng)傳代
注意：如為凍存管，請(qǐng)收到后立即解凍培養(yǎng)。若來不及解凍，請(qǐng)儲(chǔ)存于液氮中(存儲(chǔ)于負(fù) 80度，會(huì)降低細(xì) 胞存活率)
培 養(yǎng) 瓶 中 細(xì) 胞 操 作 步 驟
對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，寄送前，我們會(huì)將培養(yǎng)基充滿整個(gè)培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過程中
貼壁細(xì)胞的脫落。
1、收到細(xì)胞產(chǎn)品后，請(qǐng)注意觀察是否有污染 。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì) 菌污染。
因在運(yùn)輸過程中存在顛簸，且有些細(xì)胞對(duì)溫度變化也很敏感，可能存在一些細(xì)胞脫落漂浮的情況，這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞，
請(qǐng)勿丟棄，可離心富集后傳代使用。
2、對(duì)于貼壁的細(xì)胞，在生物安 全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基，至剩余5-8 mL 左右，隨后將細(xì)胞置
于含有 5% CO2 的 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細(xì)胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶，請(qǐng)立即傳代。
3、對(duì)于懸浮的細(xì)胞，在生物安 全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管中，離心200×g/ 5 - 10 min，去除上清后，
用 5 mL 培養(yǎng)基吹散細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于含有 5% CO2的 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
凍存細(xì)胞操作步驟
注意：為保存細(xì)胞的高存活率，請(qǐng)收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。
1、將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動(dòng)，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需要迅速，大約2分鐘。
2、一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3、將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有凍存液的上清。
4、用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。
5、將細(xì)胞置于含有5%CO,的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)
1、吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS清洗一次。
2、加入 1.0 mL 0.25(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA溶液，并置于37C培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要
3至5分鐘(此處為12.5cm2培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實(shí)際情況增減用量)。
3、加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。
4、離心200xg/5 min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸，取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
至總體積為4mL。
5、將細(xì)胞置于含有5%CO,的37C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
傳代比例:建議1:2至1:3(以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算)。
培養(yǎng)基換液: 每隔 2至 3天。
